Μοριακές Κυτταρογενετικές Μέθοδοι

Τι είναι οι μοριακές κυτταρογενετικές μέθοδοι;

Η μοριακή κυτταρογενετική είναι η αριθμητική και δομική εξέταση των χρωμοσωμάτων.

Το πλεονέκτημά του έναντι των κλασικών κυτταρογενετικών μεθόδων είναι ότι η μικροδιαγραφή, ο διπλασιασμός ή οι μετατοπίσεις που δεν μπορούν να διακριθούν με την κλασική μέθοδο μπορούν επίσης να διακριθούν με μοριακές μεθόδους.

Αυτή η κύρια επικεφαλίδα περιλαμβάνει μεθόδους όπως FISH (Fluorescent in situ υβριδισμός), ACGH (συγκριτικός υβριδισμός γονιδιώματος συστοιχίας) και NGS (αλληλουχία επόμενης γενιάς).

Με την εφαρμογή μοριακών κυτταρογενετικών μεθόδων στο έμβρυο, τα έμβρυα ελέγχονται χρωμοσωμικά πριν μεταφερθούν στη μήτρα.

Για το λόγο αυτό, η εφαρμογή αυτών των εξετάσεων στο έμβρυο ονομάζεται προεμφυτευτική γενετική δοκιμή (PGT) – γενετική εξέταση που πραγματοποιήθηκε πριν από την εμφύτευση.

PGT-A στις υπότιτλους αυτής της δοκιμής σημαίνει PGT για ανευπλοειδία.

Με άλλα λόγια, το εάν ο αριθμός των χρωμοσωμάτων στο έμβρυο είναι φυσιολογικός ή όχι καθορίζεται με τη μέθοδο PGT-A.

Έτσι, πολλά χρωμοσωμικά προβλήματα όπως η τρισωμία 21 (σύνδρομο Down) αναγνωρίζονται πριν το έμβρυο μεταφερθεί στη μήτρα.

Με το PGT-M, το οποίο είναι ένα άλλο θέμα στις μεθόδους PGT, μονογονικές, δηλαδή μονογονιδιακές ασθένειες όπως SMA, θαλασσαιμία και νευροϊνωμάτωση, μπορούν να διακριθούν, ενώ τα έμβρυα ελέγχονται πριν από τη μεταφορά σε ζευγάρια με χρωμοσωμικές μετατοπίσεις από Μέθοδος PGT-SR. Είναι δυνατή η επίτευξη υγιών εγκυμοσύνων και ζωντανών γεννήσεων.

Για ποιον είναι κατάλληλες οι μοριακές κυτταρογενετικές μέθοδοι και οι γενετικές δοκιμές στο έμβρυο;

Στις διαδικασίες εξωσωματικής γονιμοποίησης, ο κύριος στόχος δεν είναι μόνο η επίτευξη εγκυμοσύνης, αλλά και η συνέχιση της εγκυμοσύνης με υγεία και η επίτευξη υγιούς ζωντανού τοκετού.

Για αυτό, η επιλογή του σωστού εμβρύου πριν από την εμβρυομεταφορά έχει μεγάλη σημασία.

Εκτός από τεχνικές όπως η καλλιέργεια βλαστοκύστης, η χρήση εμβρυοσκοπίου, η τεχνητή νοημοσύνη, οι προεμφυτευτικές γενετικές δοκιμές και οι μοριακές κυτταρογενετικές μέθοδοι μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την επιλογή εμβρύων.

Όλες αυτές οι μέθοδοι συνιστώνται ειδικά στις ακόλουθες ομάδες μετά τη λήψη λεπτομερούς ιστορικού από ζευγάρια:

προχωρημένη μητρική ηλικία

Ιστορικό επαναλαμβανόμενης απώλειας εγκυμοσύνης

επαναλαμβανόμενη ανεπάρκεια εξωσωματικής γονιμοποίησης

σοβαρός ανδρικός παράγοντας

ένας γνωστός φορέας ασθένειας ενός γονιδίου

ένας γνωστός φορέας μετατόπισης

Ιστορικό εμβρυϊκής δομικής ανωμαλίας ή χρωμοσωμικής νόσου σε προηγούμενες εγκυμοσύνες

Φυσικά, όλα τα ζευγάρια εκτός από αυτήν την ομάδα μπορούν να συντομεύσουν την περίοδο επίτευξης εγκυμοσύνης ή προαιρετικά μπορεί να εφαρμοστεί οποιαδήποτε από αυτές τις μεθόδους.

Τι είναι οι μοριακές κυτταρογενετικές μέθοδοι;

βουτιά

ακμή

NGS

Τι είναι το ψάρι;

Η μέθοδος υβριδισμού situ του φθορισμού (FISH) είναι μια μοριακή τεχνική που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση συγκεκριμένων θραυσμάτων DNA σε κύτταρα.

Σε αυτή τη μέθοδο, χρησιμοποιούνται φθορίζουσες βαφές για να κάνουν ορατό το DNA μέσα στα κύτταρα.

Με αυτόν τον τρόπο, μπορεί να προσδιοριστεί πού βρίσκονται ορισμένα θραύσματα DNA στα κύτταρα και πόσο πυκνά είναι.

Η μέθοδος FISH χρησιμοποιείται για τον έλεγχο του αριθμού των χρωμοσωμάτων και της δομής των εμβρύων.

Με τη μέθοδο FISH, είναι δυνατό να αξιολογηθούν 3 ή 5 ζεύγη χρωμοσωμάτων από 23 ζεύγη χρωμοσωμάτων, συμπεριλαμβανομένων των φυλετικών χρωμοσωμάτων.

Έτσι, είναι δυνατή η διάγνωση του φύλου του εμβρύου και η διάγνωση ειδικών συνδρόμων όπως η μονοσωμία ή η τρισωμία 13, 18, 21.

Επιπλέον, προκειμένου να αξιολογηθεί η γενετική δομή του εμβρύου και να διασφαλιστεί η επιλογή εμβρύων με υγιή δομή χρωμοσώματος σε άτομα με φορείς μετατόπισης, είναι δυνατή η επιλογή εμβρύων με τη χρήση ειδικών για την περιοχή ανιχνευτών και η επιλογή εμβρύων με τη μέθοδο FISH.

Χρειάζονται περίπου 24 ώρες για να ληφθούν τα αποτελέσματα των βιοψιών που λαμβάνονται με τη μέθοδο FISH.

Επομένως, είναι δυνατό να γίνουν νέες μεταφορές στον ίδιο κύκλο μετά τη λήψη των αποτελεσμάτων.

Ποια είναι η μέθοδος CGH; / Τι είναι ο συγκριτικός γονιδιωματικός υβριδισμός;

Η μέθοδος ACGH (Array Comparative Genomic Hybridization – Comparative Genomic Hybridization) είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για την εξέταση της δομής και της τάξης του DNA στα χρωμοσώματα των κυττάρων.

Αυτή η μέθοδος μπορεί να παρέχει αριθμητική και δομική εξέταση και των 23 ζευγών χρωμοσωμάτων στο έμβρυο.

Η βάση της μεθόδου βασίζεται στη σύγκριση της δομής του DNA του εμβρύου με τη γνωστή δομή του DNA.

Στη θεραπεία εξωσωματικής γονιμοποίησης, η μέθοδος ACGH χρησιμοποιείται για την εξέταση της δομής και της τάξης των χρωμοσωμάτων των εμβρύων.

Η δομή και η τάξη των χρωμοσωμάτων των εμβρύων συμβάλλουν στην ανάπτυξη και την υγεία του εμβρύου, καθώς και στην πρόοδο της υγείας των κυήσεων που θα συμβούν.

Για το λόγο αυτό, τα πιο υγιή και καλύτερα αναπτυξιακά έμβρυα επιλέγονται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ACGH κατά την επιλογή των εμβρύων στη θεραπεία εξωσωματικής γονιμοποίησης.

Έτσι, το ποσοστό επιτυχίας της θεραπείας με εξωσωματική γονιμοποίηση προσπαθεί να αυξηθεί.

Σήμερα, η χρήση του NGS (αλληλουχία επόμενης γενιάς) έχει έρθει στο προσκήνιο στην εξέταση της χρωμοσωμικής δομής των εμβρύων αντί του AcGH.

Τι είναι το NGS;

Το NGS (Next Generation Sequencing) είναι η νεότερη γνωστή τεχνική μεταξύ των μεθόδων προεμφυτευτικής γενετικής δοκιμής (PGT) σήμερα.

Χάρη στην τεχνική αλληλουχίας νέας γενιάς, είναι δυνατή η ανίχνευση δομικών και αριθμητικών ανωμαλιών στα έμβρυα.

Σε αυτή την τεχνική, πρώτα, το DNA του ληφθέντος δείγματος ενισχύεται και μετά διαβάζονται οι αλληλουχίες DNA που λαμβάνονται με ενζυματική διάσπαση.

Έτσι, προσδιορίζεται ο συνολικός αριθμός μετρήσεων για κάθε έμβρυο.

Αυτή η μέθοδος είναι μια πιο ακριβής τεχνική μέτρησης από τις μεθόδους που χρησιμοποιήθηκαν προηγουμένως και το ποσοστό ακρίβειας είναι πολύ υψηλότερο.

Χάρη σε αυτή τη μέθοδο, η πιθανότητα αναγνώρισης του χρωμοσωμικού μωσαϊκισμού στα έμβρυα έχει επίσης αυξηθεί.

Ως αποτέλεσμα της δοκιμής NGS, δίνονται 3 διαφορετικά αποτελέσματα στα έμβρυα.

Ευπλοειδής (κανονικό): Υπάρχουν 46 χρωμοσώματα στο έμβρυο και τα χρωμοσώματα είναι δομικά φυσιολογικά. Αυτά τα έμβρυα μπορούν να μεταφερθούν.

Ανευπλοειδής (μη φυσιολογικός): Ο αριθμός των χρωμοσωμάτων στο έμβρυο είναι διαφορετικός από 46. Αυτά τα έμβρυα δεν μπορούν να μεταφερθούν.

Μωσαϊκό: Σε κύτταρα που ελήφθησαν δείγματα από το έμβρυο, συνυπάρχουν κύτταρα με φυσιολογικούς και μη φυσιολογικούς αριθμούς χρωμοσωμάτων. Ανάλογα με το ποσοστό μωσαϊκού και τον τύπο που ανιχνεύεται στο έμβρυο, το ζευγάρι μπορεί να μεταφερθεί εάν δεν έχει άλλο φυσιολογικό έμβρυο.

Σε εμβρυομεταφορές που πραγματοποιούνται χωρίς μοριακές κυτταρογενετικές μεθόδους, εάν το έμβρυο είναι δομικά ανευπλοειδές, δηλαδή ανώμαλο, μπορούν να συναντηθούν τρία πιθανά αποτελέσματα εάν αυτή η κατάσταση δεν είναι γνωστή.

Το έμβρυο δεν προσκολλάται καθόλου στη μήτρα, δηλαδή δεν μπορεί να επιτευχθεί εγκυμοσύνη.

τέλος της εγκυμοσύνης στις πρώτες εβδομάδες κύησης, παρά την προσκόλληση του εμβρύου στη μήτρα

Εγκυμοσύνη εγκυμοσύνης, αλλά ανίχνευση ανωμαλιών στο έμβρυο κατά τον προσυμπτωματικό έλεγχο ή τις διαγνωστικές εξετάσεις στις επόμενες εβδομάδες κύησης.

Για να αποφευχθούν όλες αυτές οι αρνητικές συνέπειες, πολλά ζευγάρια σήμερα συχνά στρέφονται σε μεθόδους γενετικής διάγνωσης προεμφυτευτικής.

Σε περιπτώσεις όπου η ηλικία της μητέρας είναι νεαρή και χρησιμοποιούνται ωοκύτταρα δότη, το ποσοστό χρωμοσωμικών ανωμαλιών είναι εξαιρετικά χαμηλό, αλλά δεν μπορεί να αγνοηθεί εντελώς.

Για το λόγο αυτό, εκτός από τις προαναφερθείσες ενδείξεις, τα ζευγάρια έχουν την ευκαιρία να κάνουν τα έμβρυά τους με τη δική τους θέληση.

Ωστόσο, δεν πρέπει να λησμονείται ότι αυτές οι εξετάσεις δεν κάνουν διάκριση μεταξύ χρωμοσωμικών ασθενειών και θα πρέπει να γίνουν πρόσθετες εξετάσεις για τον έλεγχο αυτών των ασθενειών.

Όταν εφαρμόζεται η τεχνική NGS, τα αποτελέσματα λαμβάνονται σε περίπου 14 ημέρες.

Για το λόγο αυτό, μετά τη διαδικασία βιοψίας, τα έμβρυα καταψύχονται και αναμένεται να ληφθούν τα αποτελέσματα.

Όταν επιτευχθεί το αποτέλεσμα, εισάγεται μια περίοδος προετοιμασίας που διαρκεί περίπου 20 ημέρες για τη μεταφορά κατεψυγμένων εμβρύων στη μήτρα.

Όταν ολοκληρωθεί το ενδομήτριο παρασκεύασμα, τα έμβρυα που είναι γνωστό ότι έχουν υγιή χρωμοσωμική δομή διαλύονται και μεταφέρονται στη μήτρα.